Abstract Cancer is considered the leading cause of death worldwide, and the number of new cases is expected to rise over the next few years. In this context, plant materials are increasingly studied in the search for substances to prevent and/or treat this disease. In this work, the cytotoxic activity of extracts from plants and friable calluses of five Brazilian peanut cultivars (IAC 886, IAC Caiapó, IAC Tatu ST, IAC 8112 and BR-1) against a leukemic cell line (K562) was compared. Inhibition of K562 cells viability (79.8%) was significantly higher in response to extracts from calluses of cultivar IAC 886 as compared to extracts of aerial parts of in vivo and in vitro plants from the same cultivar. Callus extracts displayed low toxicity on non-tumor cells (NIH-3T3 fibroblasts and peripheral blood mononuclear cells). Trans-resveratrol was found in extracts from aerial parts of cultivar IAC Tatu ST and from calluses of cultivar IAC 886. In addition, three compounds with UV spectrum compatible with phenolic compounds were detected in the samples. Calluses from cultivar IAC 886 displayed higher relative contents of these compounds, which can be contributing to their cytotoxic activity.

Resumo Os transportadores ABC constituem uma superfamília de proteínas transmembranares que atuam mediando a translocação de vários substratos através da membrana, utilizando a energia da hidrólise de ATP. Esse mecanismo de efluxo de substratos não relacionados (resistência a múltiplas drogas) tem sido associado a várias doenças e é um problema na eficácia da quimioterapia. Atualmente, aproximadamente 25% dos medicamentos prescritos no mundo são derivados de plantas. Casearia sylvestris é comumente encontrada nas Américas e diferentes partes desta planta são popularmente usadas para tratar várias doenças. Estudos anteriores também confirmaram as atividades biológicas de C. sylvestris, como propriedades antitumorais, anti-leishmania e antifúngica. Desta forma, a proposta deste trabalho foi demonstrar a fração 1-6 de C. sylvestris, o óleo essencial, foi capaz de reverter o fenótipo de resistência ao fluconazol no modelo de Saccharomyces cerevisiae mediado pela proteína heteróloga CaCdr2p de Candida albicans. O valor da CIM da fração 1-6 combinada com fluconazol no ensaio tipo tabuleiro de xadrez diminuiu aproximadamente 4 vezes, sugerindo um efeito sinérgico. Além disso, a fração 1-6 aumentou o acúmulo intracelular de rodamina 6G, de 17% para 49% na presença de glicose. Os dados indicam que a fração 1-6 de C. sylvestris é um potencial reversor do fenótipo de resistência ao fluconazol.

Abstract ABC transporters constitute a superfamily of transmembrane proteins that act mediating the translocation of several substrates across the membrane, using the energy of ATP hydrolysis. This mechanism of unrelated substrates efflux (multidrug resistance) has been associated with several diseases and it is a problem in chemotherapy efficacy. Nowadays, approximately 25% of the prescription drugs in the world are derived from plants. Casearia sylvestris is commonly found in the Americas and different parts of this plant are popularly used to treat several diseases. Previous studies have also confirmed the biological activities of C. sylvestris, such as anti-tumor, anti-leishmania, and antifungal properties. Then, the propose of this study was demonstrate that fraction 1-6 of C. sylvestris, essential oil, was able to reverse the fluconazole resistance phenotype in the Saccharomyces cerevisiae model mediated by the heterologous protein CaCdr2p from Candida albicans. The MIC value of fraction 1-6 combined with fluconazole in the checkerboard assay decreased approximately 4-fold, suggesting a synergistic effect. In addition, fraction 1-6 increased intracellular rhodamine 6G accumulation from 17% to 49% in the presence of glucose. Data indicate that C. sylvestris fraction 1-6 is a potential reverser of the fluconazole resistance phenotype.

ABSTRACT Many factors may influence the genetic stability of plant in vitro clones, among which the genotype and the regenerative process induced by plant growth regulators. The resulting somaclonal variations may be useful for breeding projects, but may be detrimental to germplasm conservation. The objective of this work was to evaluate the genetic stability of Solanum melongena cv. ‘Florida Market’ clones, obtained in response to different plant growth regulators. For the production of clones, leaf explants were used from commercial seed germinated plants. The explants were inoculated in Murashige and Skoog medium supplemented with different plant growth regulators at predefined concentrations. The DNA was extracted by the CTAB method from leaves of complete plants obtained by somatic embryogenesis induced by naphthaleneacetic acid (NAA) or indirect organogenesis induced by benzylaminopurine (BAP) or thidiazuron (TDZ). For the RAPD, 117 DNA samples were amplified by ten decamer primers and 49 specific bands were selected among the products for the comparative study. A total of 5733 fragments were obtained, with a rate of 5.37% polymorphism. NAA did not generate polymorphism and the BAP was responsible for the highest rate obtained (14.28%). Two RAPD primers were identified as markers for monitoring the genetic stability of eggplant. The polymorphic pattern was observed only in clones originating from indirect organogenesis. These results indicate the usefulness of a monitoring protocol for studies using in vitro cloned eggplant.

RESUMEN Muchos factores pueden influir en la estabilidad genética de los clones de plantas in vitro, entre los que se encuentran el genotipo y el proceso regenerativo inducido por los reguladores del crecimiento. Por lo tanto, las variaciones somaclonales resultantes del cultivo pueden ser útiles para proyectos de mejoramiento genético, pero pueden ser perjudiciales para la conservación de germoplasma. El objetivo de este estudio fue evaluar la estabilidad genética de Solanum melongena cv. ‘Florida Market’, obtenida en respuesta a diferentes reguladores del crecimiento. Para la producción de clones se utilizaron explantes de hojas provenientes de plantas obtenidas de semillas germinadas. Los explantes se inocularon en medio de cultivo Murashige y Skoog con los diferentes reguladores del crecimiento en concentraciones predefinidas. El ADN se extrajo mediante el método CTAB a partir de plantas completas obtenidas por medio de embriogénesis somática inducida por ácido naftalenoacético (ANA) u organogénesis indirecta inducida por bencilaminopurina (BAP) o tidiazurón (TDZ). Para el RAPD, 117 muestras de ADN se amplificaron mediante diez cebadores y se seleccionaron 49 bandas puntuales entre los productos, para el estudio comparativo. Se obtuvieron un total de 5733 fragmentos, con una tasa de 5.37% de polimorfismo. ANA no generó polimorfismo y BAP fue responsable de la tasa más alta obtenida (14.28%). Se identificaron dos cebadores RAPD como marcadores para monitorear la estabilidad genética de la berenjena. El patrón polimórfico se observó solo en los clones originados en la organogénesis indirecta. Estos resultados indican la utilidad de un protocolo de monitoreo para estudios que usan berenjena clonada in vitro.

Abstract Passiflora species are well known for their common use in popular medicine for the treatment of several diseases, such as insomnia, anxiety, and hysteria, in addition to their anti-inflammatory, antioxidant, analgesic and antibacterial potential. However, few data about the chemical composition and the medicinal potential of in vitro derived materials are available. Therefore, the goal of this work was to compare, for the first time, the phytoconstituents of in vitro derived materials of four Passiflora species, and evaluate the antibacterial potential of their extracts against 20 Gram-positive and negative strains. Chromatographic analysis indicated the presence of saponins in roots extracts from all studied species, whereas leaf extracts presented both saponins and flavonoids. Extracts from leaves and roots of P. alata and P. foetida exhibited a selective inhibitory activity against B. thuringiensis and S. pyogenes, which might be related to the presence of a high concentration of secondary metabolites, including flavonoids and saponins.

ABSTRACT Casearia genus (Salicaceae) is found in sub-tropical and tropical regions of the world and comprises about 160-200 species. It is a medicinal plant used in South America, also known as “guaçatonga”, “erva-de-tiú”, “cafezinho-do-mato”. In Brazil, there are about 48 species and 12 are registered in the State of Rio de Janeiro, including Casearia sylvestris Sw. There are many studies related to the chemical profile and cytotoxic activities of extracts from these plants, although few studies about the antifungal potential of the essential oil have been reported. In this work, we have studied the antifungal properties of the essential oil of C. sylvestris leaves, as well as of their fractions, against four yeasts (Saccharomyces cerevisae, Candida albicans, C. glabrata and C. krusei) for the first time. The chemical analysis of the essential oil revealed a very diversified (n = 21 compounds) volatile fraction composed mainly of non-oxygenated sesquiterpenes (72.1%). These sesquiterpenes included α-humulene (17.8%) and α-copaene (8.5%) and the oxygenated sesquiterpene spathulenol (11.8%) were also identified. Monoterpenes were not identified. The fractions are mainly composed of oxygenated sesquiterpenes, and the most active fraction is rich in the sesquiterpene 14-hydroxy -9-epi-β-caryophyllene. This fraction was the most effective in inhibiting the growth of three yeast strains.

O trabalho descreve um protocolo para a propagação in vitro de Cleome rosea por embriogênese somática. Explantes foliares e caulinares, obtidos de plantas germinadas sob condições in vivo, foram cultivados em meio de Murashige and Skoog (MS) suplementado com ácido 3-indolacético (AIA), ácido naftalenoacético (ANA), ácido 4-amino-3,5,6-tricloropicolínico (picloram) ou ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D). Calos de aspecto nodular foram produzidos a partir de ambos os tipos de explante na presença de 4,5 e 9,0 μM de 2,4-D. O desenvolvimento e a maturação de embriões somáticos foram alcançados quando calos obtidos de explantes caulinares foram transferidos para meio de cultura suplementado com uma concentração de 2,4-D dez vezes menor do que aquelas utilizadas na indução do processo de calogênese (0,45 e 0,90 μM). Calos derivados de explantes foliares não produziram embriões ao serem submetidos a estes mesmos tratamentos. Os maiores valores de freqüência de calos embriogênicos (85%) e número médio de embriões por calo (13,45±2,8) foram alcançados durante a primeira subcultura em meio suplementado com 0,90 μM de 2,4-D. O processo de conversão dos embriões somáticos em plantas foi observado após transferência dos embriões para meio MS sem suplementação hormonal solidificado com 2 g.L-1 de fitagel. Três meses após a transferência para condições ex vitro a taxa de aclimatização alcançada foi de 53% e as plantas apresentavam um aspecto fenotípico normal.

This paper describes a protocol for the efficient vegetative propagation of Cleome rosea by somatic embryogenesis. Leaf and stem explants from nursery-grown seedlings of C. rosea were cultivated on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with indole-3-acetic acid (IAA), a -naphthaleneacetic acid (NAA), 4-amino-3,5,6-trichloropicolinic acid (picloram) or 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). Nodular calli were produced from both explant types in the presence of 4.5 and 9.0 µM 2,4-D. Embryo development and maturation were achieved when calli from stem explants were transferred to media containing a ten-fold reduction of 2,4-D concentration initially used (0.45 and 0.90 µM). Leaf-derived calli did not form embryos with the same treatments. The highest frequency of embryogenic callus formation (85%) and number of embryo per callus (13.45 ± 2.8) were achieved during the first subculture on medium supplemented with 0.90 µM 2,4-D. Embryo conversion into plantlets was achieved following transfer to growth regulator-free MS medium solidified with 2 g.L-1 phytagel. An acclimatization rate of 53% was found three months after transfer to ex vitro conditions and the recovered plants presented a normal phenotypic aspect.

(Germinabilidade de sementes de espécies endêmicas de Encholirium Mart. ex Schult. & Schult. f. e Dyckia Schult. & Schult. f. (Bromeliaceae) após dessecação, armazenamento e criopreservação). O armazenamento de sementes requer a determinação prévia das condições ótimas de temperatura e luz para a germinação, assim como da tolerância à dessecação e a baixas temperaturas. O objetivo deste trabalho foi o estudo do efeito da dessecação, armazenamento a baixa temperatura e criopreservação de seis espécies de Encholirium e duas de Dyckia, selecionadas de acordo com critérios de vulnerabilidade. A germinabilidade de sementes recém-coletadas variou entre 35 e 95%. As sementes apresentaram comportamento fotoblástico, uma vez que a presença de luz foi necessária para induzir a germinação ou aumentar sua eficiência. A dessecação não afetou significativamente a germinabilidade das sementes testadas, com exceção de E. heloisae e E. scrutor. Sementes dessecadas e armazenadas durante um ano a 4 e -20 ºC não apresentaram alterações na germinabilidade, exceto em E. pedicellatum. A germinabilidade após congelamento em nitrogênio líquido foi maior que ou similar à obtida no controle, em todas as espécies estudadas. Entretanto, em E. pedicellatum a tolerância ao congelamento só foi obtida após dessecação das sementes a um conteúdo hídrico de 2,5%. Considerando a tolerância à dessecação e ao armazenamento em baixas temperaturas, as sementes estudadas podem ser classificadas como ortodoxas e conservadas ex situ.

(Germinability after desiccation, storage and cryopreservation of seeds from endemic Encholirium Mart. ex Schult. & Schult. f. and Dyckia Schult. & Schult. f. species (Bromeliaceae)). Seed storage procedures require previous determination of optimal temperature and light conditions for germination, as well as of tolerance to desiccation and low temperatures. The aim of this paper was to study the effects of desiccation, storage at low temperatures and cryopreservation on the germinability of seeds of six Encholirium and two Dyckia species, which were selected according to vulnerability criteria. Initial germinability of newly harvested seeds varied from 35 to 95%. Seeds presented photoblastic behaviour since light was necessary to induce or increase germination. Except for E. heloisae and E. scrutor, desiccation did not affect significantly the germinability of tested seeds. Storage for one year at 4 and -20 ºC did not affect the germinability of desiccated seeds, except for E. pedicellatum. Germinability after freezing in liquid nitrogen was higher than or similar to control seeds for all species. However, freezing tolerance of E. pedicellatum seeds was only achieved after desiccation to 2.5% moisture content. As regards tolerance to desiccation and to storage at low temperatures, the seeds studied here can be classified as orthodox and conserved ex situ.

Plantas de Cryptanthus sinuosus foram cultivadas em três substratos (mesocarpo de coco - MC; mesocarpo de coco lavado - MCL e xaxim-X), visando comparar o efeito da fibra de coco verde, como substrato, àquele da fibra de xaxim sobre o crescimento e teores de nutrientes das plantas, sob três níveis de adubação foliar: 50, 100 e 150% de solução contendo 210 mg L-1 de N, 31 mg L-1 de P e 234 mg L-1 de K. O experimento constou de um fatorial em delineamento de blocos ao acaso, com quatro repetições e três plantas por parcela, uma planta por vaso e conduzido em casa de vegetação. O número de folhas, diâmetro da roseta, massa da matéria seca (MS) de folhas e raízes e teores de nutrientes foram avaliados. As plantas cultivadas em X apresentaram valores de MS de folhas e de raízes mais altos que aquelas em MC, mas não diferiram estatisticamente daqueles observados nas plantas em MCL. As plantas cultivadas em MC e MCL apresentaram características semelhantes indicando que a alta condutividade elétrica encontrada no substrato MC não prejudicou o acúmulo de matéria seca. As plantas cultivadas em MC e MCL apresentaram menores teores foliares de N, P, S que as cultivadas em X, porém com coloração e arquitetura foliares mais atrativas. Os diferentes níveis de adubação utilizados não tiveram efeito diferenciado sobre as características de crescimento, nem sobre os teores de nutrientes nas plantas.

Cryptanthus sinuosus plants were grown in three substrates (coconut mesocarp - MC, rinsed coconut mesocarp - MCL and tree fern fiber-X) aiming to compare the effect of green coconut fiber as substrate with tree fern fiber on the plant growth and nutrient contents, under three foliar fertilization levels (50, 100 and 150% of a solution containing 210 mg L-1 of N, 31 mg L-1 of P and 234 mg L-1 of K). The experimental design was a factorial scheme of randomized blocks with four replications and three plants per plot, one plant per pot, and was carried out in a greenhouse. The number of leaves, rosette diameter, leaf and root dry matter mass and nutrient contents were evaluated. Plants grown in X presented higher leaf and root dry matter mass values than those grown in MC, but did not differ from those observed on plants in MCL. The plants grown in MC and MCL showed similar characteristics indicating that the high electric conductivity of MC did not impair dry matter accumulation. The plants grown in MC and MCL showed lower N, P, S leaf contents than those grown in X, nevertheless they showed more attractive leaf color and architecture. The levels of fertilization did not differ the growth characteristics or the plant nutrient contents.

O objetivo deste trabalho foi estabelecer sistemas de multiplicação de plantas de cana-de-açúcar in vitro e avaliar sua utilização, como material inicial, para a indução de regeneração a partir de ápices caulinares. Três métodos de cultivo foram avaliados: cultura em meio semi-sólido, cultura líquida estacionária e cultura líquida sob agitação. A taxa de multiplicação mais elevada foi alcançada por meio da cultura líquida sob agitação. Ápices caulinares, excisados dessas plantas, apresentaram taxas de regeneração in vitro compatíveis com sua utilização em protocolos de transformação. Calos resistentes a PPT e GUS-positivos foram obtidos de explantes da variedade Chunnee com inoculação de Agrobacterium tumefaciens C58C1 (pMP90) (pDUBarA9). O protocolo estabelecido a partir de cultivo in vitro pode ser utilizado para a produção de plantas transgênicas de cana-de-açúcar, visando à realização de estudos de regulação da expressão gênica, assim como à introdução de características de interesse agronômico.

The objective of this work was to establish in vitro systems for sugarcane plant multiplication and for regeneration from shoot apices excised from these plants. Three methods were analyzed: culture on semi-solid medium and liquid culture with or without agitation. The highest regeneration rates were obtained from cultures in liquid-medium with agitation. Shoot tips derived from these plants presented regeneration rates suitable for utilization in transformation protocols. PPT-resistant and GUS positive calluses were obtained from explants of in vitro plants of Chunnee variety inoculated with Agrobacterium tumefaciens C58C1 (pMP90) (pDUBarA9). The established in vitro culture system can be applied for transgenic sugarcane production, aiming at gene regulation studies and introduction of agronomical traits.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de diferentes substratos e pré-tratamentos in vitro, na aclimatização de plantas in vitro de Arachis retusa. As plantas foram transferidas para Plantmax ou areia e adubadas com solução de Hoagland. Plantas mantidas em areia, com adubação ou sem adubação, apresentaram maiores taxas de sobrevivência. Para avaliação da influência de pré-tratamentos in vitro, segmentos de caule foram cultivados em meio MS suplementado com diferentes concentrações de sacarose. As maiores taxas de sobrevivência e desenvolvimento foram observadas em plantas cultivadas em sacarose a 1,5% e 3%. Depois de cinco meses, foram observadas a floração e a produção de frutos.

The objective of this work was to evaluate the influence of substrate and preconditioning treatments on the acclimatization of in vitro plants of Arachis retusa. Plants were transferred to Plantmax or sand, and fertilized with Hoagland's nutrient solution. Plants maintained in sand, with or without fertilizer, showed the highest survival rates. In order to evaluate the influence of in vitro preconditioning treatments, stem segments were cultured on MS medium supplemented with different sucrose concentrations. The highest survival and developmental rates were observed in plants from two accessions cultured on MS supplemented with 1.5% and 3% sucrose. Flowering and fruit production were observed after five months.

A berinjela é uma espécie solanácea não tuberosa de importância agronômica, cultivada principalmente por seus frutos. Na medicina popular, a berinjela é indicada para o tratamento de várias doenças, incluindo diabetes, artrite, asma e bronquite. A berinjela é suscetível a várias doenças e pragas que causam perdas econômicas significativas. Esse problema tem sido abordado com técnicas convencionais de melhoramento, utilizando espécies silvestres resistentes de Solanum, que possuem uma grande diversidade genética e são fontes de genes de interesse agronômico. A aplicação de metodologias in vitro à berinjela tem resultado em sucesso considerável. Os tecidos de berinjela apresentam um alto potencial morfogenético, sendo úteis para estudos de desenvolvimento e para o estabelecimento de abordagens biotecnológicas para a produção de variedades melhoradas, tais como o resgate de embriões, a seleção in vitro, a hibridização somática e a transformação genética. O conjunto dessas características também torna a berinjela um modelo completo para estudos em diferentes áreas de pesquisa, incluindo o controle da expressão gênica e a avaliação da estabilidade de somaclones derivados de diferentes processos morfogenéticos. Neste trabalho, são analisados fatores importantes que afetam a eficiência dos processos de regeneração in vitro por meio de organogênese e embriogênese, assim como de transformação genética, explorando ainda o potencial da espécie como planta modelo para o estudo de vários aspectos da genética e fisiologia vegetais.

Eggplant is an agronomically important non-tuberous solanaceous crop grown primarily for its large oval fruit. In popular medicine, eggplant is indicated for the treatment of several diseases, including diabetes, arthritis, asthma and bronchitis. Eggplant is susceptible to a number of diseases and pests capable of causing serious crop losses. This problem has been addressed by hybridizing eggplant with wild resistant Solanum species, which present a wide genetic diversity and are source of useful agronomic traits. The application of in vitro methodologies to eggplant has resulted in considerable success. Eggplant tissues present a high morphogenetic potential that is useful for developmental studies as well as for establishing biotechnological approaches to produce improved varieties, such as embryo rescue, in vitro selection, somatic hybridization and genetic transformation. Taken together, these characteristics also make eggplant a complete model for studies on different areas of plant science, including control of gene expression and assessment of genetic stability of somaclones derived from different morphogenetic processes. In the present study, important factors that affect the efficiency of in vitro regeneration through organogenesis and embryogenesis as well as genetic transformation are analyzed. The potential of this species as a model plant for studying various aspects of plant genetics and physiology is also discussed.

A embriogênese somática em berinjela foi induzida a partir de explantes cotiledonares cultivados em meio MS suplementado com 54 µM de ANA. A análise anatômica do início de formação e desenvolvimento de embriões somáticos foi realizada durante as primeiras quatro semanas. A formação de pré-embriões foi observada após o segundo dia de cultura, diretamente a partir de células perivasculares ou a partir de massas pré-embriogênicas derivadas de massas meristemáticas indeterminadas (IMMs) formadas a partir do tecido vascular. As IMMs também deram origem a primórdios radiculares após 10 dias de cultura. A origem dos embriões é discutida, assim como as similaridades entre a formação de embriões somáticos e raízes adventícias.

Somatic embryogenesis was induced from cotyledon explants of eggplant cultured on MS medium supplemented with 54 µM NAA. Anatomical analysis of somatic embryo initiation and development was performed during the first four weeks. Proembryo formation was observed after the second day of culture, directly from perivascular cells or via pro-embryogenic masses derived from indeterminate meristematic masses (IMMs) originated in the vascular tissue. Those IMMs also gave rise to root primordia after 10 days of culture. The origin of embryos is discussed as well as the similarities between somatic embryogenesis and adventitious root formation.

A regeneração in vitro de Arachis retusa foi avaliada visando à renovação e conservação de germoplasma. A estabilidade genética de plantas derivadas de eixos embrionários e segmentos apicais foi avaliada por RAPD. Foram analisados dez oligonucleotídeos decâmeros arbitrários, dos quais cinco foram selecionados. Noventa regiões genômicas foram avaliadas, com uma média de 18 loci por clone. Todos os segmentos amplificados foram monomórficos. Estes resultados indicam que as plantas são geneticamente estáveis nas regiões genômicas examinadas e que ambos os processos são adequados para a conservação in vitro do germoplasma de Arachis.

In vitro regeneration of Arachis retusa was examined for the purpose of germplasm renewal and conservation. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprinting was used to evaluate the genetic stability of plants derived from embryo axes and apical segments. Ten arbitrary decamer primers were screened and five of them were selected. Ninety genomic regions were evaluated, with an average of 18 loci per clone. All amplified segments were monomorphic. The results indicate that recovered plants are genetically stable at the assessed genomic regions and that both regeneration processes are suitable for in vitro germplasm preservation of Arachis species.

Foi avaliada a morfogênese in vitro a partir de explantes de folha imatura excisados de plantas de duas variedades nacionais (RB739735 e RB72454) de cana-de-açúcar (Saccharum officinarum L.), mantidas em campo. Os explantes foram obtidos de plantas com 6-9 meses e cultivados em meio MS sólido suplementado com 2,4-D a 9 miM. As culturas foram mantidas no escuro, durante quatro semanas. A eficiência de formação de calos foi influenciada pelo genótipo. Os calos derivados da variedade RB72454 eram mucilaginosos e não originaram plantas. Explantes da variedade RB739735 formaram calos amarelos friáveis e embriogênicos (tipo II), que mantiveram sua capacidade proliferativa por, pelo menos, seis meses. Após transferência para meio MS sem reguladores de crescimento e em condições de iluminação, 56% desses calos originaram plantas, resultando na produção de, em média, 50 plantas por calo, após dois meses de cultura. As plantas continuaram a se desenvolver, originando novos brotos após transferência para meio MS0 líquido, não sendo observadas anormalidades fenotípicas. A inibição do desenvolvimento dos calos em resposta a diferentes concentrações de antibióticos usados em protocolos de transformação genética foi também avaliada. Foi observada inibição na presença de canamicina a 128,7 miM e de higromicina a 94,8 miM. Não foi obtido nenhum efeito inibidor do antibiótico geneticina (G418), em concentrações entre 43,3 e 86,6 miM.

In vitro morphogenesis from immature leaf explants excised from field-grown plants of two Brazilian sugarcane (Saccharum officinarum L.) cultivars (RB739735 and RB72454) was evaluated. Explants were obtained from 6-9 month-old plants and cultured on solid MS medium supplemented with 9 muM 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). Cultures were maintained in the dark for four weeks. The efficiency of callus formation was influenced by the genotype. Calli derived from cv. RB72454 were mucilagenous and did not originate plants. Explants from cv. RB739735 formed yellow, friable embryogenic (type II) calli, which kept their proliferative capacity for at least six months. Upon transfer to hormone-free medium and light conditions, 56% of these calli regenerated plants, resulting in an average recovery of 50 plants per callus, after two months of culture. Plants developed further and originated lateral shoots in liquid MS0 medium. No phenotypic abnormalities were observed. Growth inhibition of calli in response to different concentrations of antibiotics used in genetic transformation protocols was also evaluated. Inhibition was observed in the presence of 128.7 muM kanamycin and 94.8 muM hygromycin. No inhibitory effect of geneticin (G418) was obtained at concentrations between 43.3 and 86.6 muM.